Managementul pierderilor în greutate uci. Testare ipoteză nulă și alternativă
Conținutul
Pentru a investiga mecanismul epuizării lipidelor de către glicoproteina zinc-α2 ZAG. Rezultate: Tratamentul acestor animale timp de 15 zile cu ZAG pg, intravenos, zilnic a dus la o reducere a greutății corporale de 6, 55 g comparativ cu controlul tratat cu soluție salină tamponată cu fosfat, fără o modificare a consumului alimentar sau a apei, ° C cresterea temperaturii rectale.
A existat un răspuns lipolitic crescut la izoproterenol, care a fost reținut timp de 3 zile in vitro în absența ZAG. Exprimarea HSL a fost de asemenea crescută în țesutul adipos subcutanat și visceral, așa cum a fost și lipaza trigliceridică adipică ATGL.
A existat o pierdere rapidă de lipidă marcată din țesutul adipos epididimal de șoareci tratați cu ZAG, dar nu din celelalte depozite, ceea ce reflectă diferența de sensibilitate față de stimulii lipolitic. Concluzie: Aceste rezultate sugerează că ZAG nu numai că induce lipoliză directă, dar, de asemenea, sensibilizează țesutul adipos la alți stimuli lipolitic. Introducere Obezitatea și efectele asociate acesteia asupra sănătății reprezintă o problemă majoră pentru lumea occidentală și se crede că apare atât prin influențe genetice, cât și prin mediul înconjurător.
Am investigat utilizarea potențială a glicoproteinei de zinc-α2 ZAG pentru tratamentul obezității prin utilizarea șoarecilor NMRI masculi ex-breeder. Cu toate acestea, studiile ulterioare au arătat că ZAG a fost produs și de o serie de țesuturi normale, incluzând atât țesuturi adipoase albe WAT și maro BAT6 cu creșteri majore de exprimare la șoareci purtând o tumoare care provoacă cașexie, masa grasa.
- Supliment de top pentru pierderea in greutate
- Предтечи обнаружили в ней потенциал; они и преобразили нас за ряд поколений, сделав такими, какие мы есть, еще до Великой Смуты.
- Pierdere în greutate de 85 kg la 60 kg
- Он состоял из ряда длинных и узких прямоугольных баков из серого блестящего сплава: каждый из них был шириной метров двадцать в направлении с востока на запад и тянулся в длину на несколько сотен метров; борта поднимались над грунтом примерно на метр.
- Istoria militara a Australiei
- Testarea ipotezei: o modalitate de a-ți dovedi revendicarea folosind p-value |
- Она вспомнила шекспировских роботов Ричарда, памятных ей по проведенным на "Ньютоне" дням.
Spre deosebire de expresia cașexie a ZAG în WAT este scăzută la subiecții umani obezi 7 și corelată negativ cu greutatea corporală, indicele de masă corporală, masa de grăsime, circumferința taliei și șoldului, managementul pierderilor în greutate uci și nivelurile de insulină din plasmă.
Nivelul de expresie al ZAG poate fi responsabil pentru unele dintre efectele obezității, deoarece animalele de ZAG "knock out" câștigă managementul pierderilor în greutate uci multă greutate, în special pe o dietă bogată în grăsimi, în timp ce adipocitele de la aceste animale au prezentat un răspuns lipolitic scăzut la diferiți agenți, catecholaminele, agoniștii beta3-adrenoreceptori p3-AR și agenții care măresc AMP ciclic.
O expresie redusă a hormonilor sensibili la lipază HSL este cel mai bine caracterizat defect care contribuie la această rezistență la catecolamine.
Efectul lipolitic decurge din activarea adenilil ciclazei pentru a produce AMP ciclic într-un proces dependent de guanozin trifosfat, 4 care este atenuat de antagonistul SR3-AR30 specific, care sugerează că este mediată prin β3-AR.
Anticorpul de capră anti-iepure conjugat cu peroxidază, membranele de nitroceluloză Managementul pierderilor în greutate uci A și kiturile de dezvoltare a chimioluminiscenței îmbunătățite au fost de la GE Healthcare Amersham, Bucks, UK.
Anticorp anti-șoarece de iepure a fost achiziționat de la Dako Cambridge, UK. Anticorpul de iepure policlonal pentru β-actina de șoarece, PD, BRLstandard pentru endotoxină, apă fără endotoxină și kitul de testare a trigliceridelor au fost achiziționate de la Sigma Aldrich Poole, Dorset, UK. Măsurătorile de glucoză s-au efectuat utilizând un kit pentru glicemie de plasmă Boots Nottingham, UK.
Originea și caracteristicile acestor animale au fost descrise în detaliu anterior. Șoarecii au fost adăpostiți într-o cameră cu aer condiționat, la 22 ± 2 ° C și hrăniți ad libitumo dietă de creștere a șobolanilor și șoarecilor Special Diet Services, Witham, Marea Britanie și apă de la robinet.
Atât greutatea corporală, cât și consumul de alimente și apă au fost monitorizate zilnic, la fel ca și temperatura corpului, cu ajutorul unui termometru rectal RS Components, Northants, UK și a fost măsurată și producția de glucoză urinară.
Mărimea completă Determinarea compoziției corporale Compoziția corpului a fost determinată gravimetric așa cum s-a descris anterior. Greutatea reziduului a dat grăsimea totală a carcasei, iar masa carcasei fără grăsime a fost calculată ca diferența dintre greutatea inițială a carcasei și greutatea apei și grăsimilor. Celulele au fost îndepărtate prin centrifugare la g timp de 15 minute și mediul ml a fost concentrat într-un volum de 1 ml PBS steril utilizând un filtru centrifugal Managementul pierderilor în greutate uci Ultra cu o decuplare de 10 kDa Millipore, Watford, Middlesex, UK.
Concentratul care conține aproximativ 2 mg de proteină a fost apoi adăugat la dietilaminoetil celuloză 2 g suspendat în 20 ml Tris 10 mM, pH 8, 8 și agitat la 4 ° C timp de 2 ore. ZAG legat la celuloza de dietilaminoetil celuloză, care a fost sedimentată prin centrifugare g timp de 15 min și a fost eluată prin agitare timp de 30 de minute la 4 ° C cu 20 ml 10 mM Tris, pH 8, 8, conținând 0, 3 M NaCI. După sedimentare, lichidul supernatant, conținând ZAG, a fost concentrat la un volum de 1 ml în PBS steril utilizând filtrul centrifugal Amicon.
Mediul de cultură a fost înlocuit zilnic. Numărul de adipocite a fost determinat cu un hemocitometru.
Lipoliza in vivo prin injectarea directă a trasorului în plăcuțele de grăsime Metodologia detaliată a fost publicată anterior. Pe scurt, acidul platimic U- 14C 50 uCi sp. Șoarecii au fost anesteziați folosind un amestec de halotan, oxigen și oxid de azot în timpul acestei proceduri.
Он может сделать все, на что способен Орел".
După injectare, rana a fost tăiată împreună și, la anumite momente de timp, animalele au fost ucise și tamponul de grăsime a fost îndepărtat împreună cu organele selectate. Cantitatea lipidelor marcate a fost determinată prin metoda lui Stansbie și colab. Flacoanele au fost răcite și materialul saponificat a fost acidulat cu 3 ml de acid managementul pierderilor în greutate uci 9 M. Cel mai bun supliment pentru pierderea rapidă în greutate solubile în acid au fost extrase de trei ori prin agitare cu eter de petrol punct de fierberecentrifugare la g timp de 15 minute și supernatantele din cele trei fracții au fost reunite și evaporate sub azot.
Definitia Ipoteză Testarea Ipoteza este o afirmație, o presupunere sau o pretenție despre valoarea parametrului medie, variație, mediană etc. O ipoteză este o ghicire educată despre ceva din lumea din jurul tău. Ar trebui să fie testabil, fie prin experiment, fie prin observație. Aceasta este o presupunere pe care o facem pe baza câștigurilor și pierderilor medii pe care le-a avut echipa sub capitană. Putem testa această afirmație pe baza tuturor datelor meciului.
Atât anticorpii primari cât și cei secundari au fost utilizați la o diluție de 1: Incubarea a fost timp de 1 oră la temperatura camerei și dezvoltarea a fost prin chemiluminescență îmbunătățită.
Bloturile au fost scanate de un densitometru pentru a cuantifica diferențele.
Studii asupra efectului antiobezitate al glicoproteinei a2-zinc la șoarecele ob / ob
Diferențele între grupuri au fost determinate printr-o analiză unică a varianței, urmată de un test de comparație multiplu Tukey-Kramer. Răspunsul lipolitic atât la izoproterenol, cât și la ZAG a fost semnificativ mai mic în adipocite din depozitele subcutanate și viscerale Figura 1bdeși nu a existat o diferență semnificativă în răspunsul adipocitelor de la animalele obeze și ne-obeze.
Adipocitele subcutanate umane proaspăt izolate au prezentat, de asemenea, lipoliză în prezența ZAG Figura 1c și izoproterenol, iar răspunsul lipolitic a fost comparabil cu adipocitele murine Figura 1b. Răspunsul lipolitic al adipocitelor umane la ZAG a fost comparabil cu cel al izoproterenolului Figura 1c.
Pentru determinarea mecanismului pentru creșterea lipolizei prin ZAG, adipocitele de la animale ne-obeze au fost incubate cu ZAG timp de 3 ore și expresia HSL a fost determinată prin Western blotting Figura 1d.
Atât ZAG, cât și izoproterenolul au mărit expresia managementul pierderilor în greutate uci a HSL și acest lucru a fost complet atenuat de inhibitorul selectiv și cel permeabil celular al protein kinazei kinazei PD activat de mitogen 10 uM23 sugerând un rol pentru calea ERK în inducerea sa. Într-adevăr, lipoliza indusă în adipocite izolate de ZAG și într-o măsură mai mică izoproterenol a fost atenuată de PD, deși aceasta nu a revenit la valorile bazale Figura 1f.
Actinul a fost folosit ca un control de încărcare. Analiza densitometrică este o medie de trei bloturi Western separate și este exprimată ca un procent de control în absența stimulării. Administrarea ZAG pg, intravenos, zilnic a condus la o reducere a greutății corporale de 6, 55 g comparativ cu martorii tratați cu PBS Figura 2a și Tabelul 1.
Nu a existat nici o modificare a consumului de alimente sau apă, însă temperatura rectală a fost crescută cu aproximativ 0, 4 ° C în 3 zile de la tratament și a rămas la acest nivel în cursul studiului, chiar și în zilele în care ZAG nu a fost administrat Figura 2b. Compoziția corporală a animalelor este prezentată în Tabelul 1. Mărimea acestor modificări în cantități absolute a fost similară, cu o pierdere de grăsime de 7, 8 g și o creștere de 6, 8 g în masa fără grăsime, ceea ce explică de ce greutatea steaguri pentru pierderea în greutate a acestor animale a fost relativ constantă pe parcursul acestui studiu Figura 2a.
După cum sa raportat anterior, 15 creșterea masei corporale slabe sa manifestat ca o creștere a greutății musculaturii gastrocnemius, deși nu a avut nici un efect asupra greutății musculaturii soleus.
După cum sa raportat anterior, 15 s-au diminuat nivelele plasmatice de glucoză și insulină, ca și cele ale acizilor grași nesteririficați și trigliceride, în timp ce nivelele de glicerol au crescut, ceea ce indică o creștere a lipolizei Tabelul 2.
Mărimea acestor modificări a fost similară cu cea raportată după administrarea ZAG de 5 zile. Excreția urinară a glucozei a fost de asemenea scăzută Figura 2cdar scăderea majoră a apărut în primele 5 zile după administrarea ZAG, după care nivelele au rămas constante.
Imagine de dimensiune completă Mărimea completă Administrarea ZAG a dus la o creștere a expresiei ZAG intracelulare, unde nivelurile au crescut aproximativ dublu în depozitele adipoase epididimale, subcutanate și viscerale după 5 zile de tratament, comparativ cu controlul PBS Figura 3a.
Acest lucru sugerează că este posibil să nu fie necesară administrarea ZAG zilnic pentru ca aceasta să își poată exercita efectele biologice. După cum se arată în figurile 2a și b, nu a existat o modificare semnificativă a pierderii în greutate corporală sau a temperaturii rectale în acele zile în care ZAG nu a fost administrat, sugerând că efectele au fost mediate de ZAG intracelular. Actinul a servit drept control al încărcării.
Expresia ZAG a fost determinată prin Western blotting. Imagine de dimensiune completă Această concluzie este justificată de modificările expresiei proteinei HSL. În plus, adipocitele de la șoareci tratați cu ZAG au prezentat un răspuns lipolitic crescut la izoproterenol și acest lucru a fost de asemenea reținut timp de 3 zile când adipocitele au fost menținute în cultura de țesut în absența ZAG Figura 3d.
O þ a cum războiul ș i Serviciul militar ș i-au definit influen ț A în istoria Australieio Parte Majora o identità þ ii na ț ionale sa construit pe conceptul idealizat al experien ț ei de război australiene ș ia stagiului satisfacerii militar, cunoscut cca Spiritul Anzac [Nota 2]. EGAL M.
Aceste rezultate din nou sugerează că efectele biologice ale ZAG se datorează exprimării sale intracelulare crescute.
Acest lucru a fost corelat cu expresia formei active fosfo a ERK, care a prezentat o reglare selectivă doar în țesutul adipos epididimal Figura 4c.
Pentru a determina rata de lipoliză în diferite depozite adipoase, acidul palmitic [U- 14C ] complexat cu albumină a fost injectat direct în depozitele de grăsime la cele trei situsuri. Acest lucru a fost demonstrat 20 pentru a reflecta comportamentul acidului gras triacylglycerol al stratului de grăsime. Rata de pierdere a acidului palmitic [U- 14 C] la cele trei locuri este prezentată în Figura 5.
Nu au existat mici pierderi de la animalele de control la orice loc în timpul celor 60 de minute de investigare, arătând că au existat pierderi minime datorate scurgerilor. Aceste rezultate confirmă faptul că rata de lipoliză după administrarea ZAG este cea mai ridicată în țesutul adipos epididimal.
Porțiunea majoră a acidului palmitic eliberat a fost transportată la ficat, iar nivelurile au fost semnificativ mai mari la animalele tratate cu ZAG Figura 5d. Nivelurile de palmitat în BAT au fost, de asemenea, mai mari la animalele tratate cu ZAG, dar diferența nu a fost atât de mare, probabil din cum slăbesc acasă unei rate de utilizare sporite.
Analiza densitometrică reprezintă o medie de trei bloturi separate.
Testarea ipotezei: o modalitate de a-ți dovedi revendicarea folosind valoarea p
Imagine de dimensiune completă De asemenea, eliberarea crescută a acidului palmitic [U- 14C ] din depozitele de grăsime epididimale se corelează cu răspunsul lipolitic crescut la ZAG Figura 1acomparativ cu adipocitele subcutanate și viscerale Figura 1b. Acest efect este de asemenea observat cu agonistul β3-AR, BRL Figura 6acare a determinat o stimulare crescută a lipolizei în adipocitele epididimale de la animalele tratate cu ZAG, în timp ce în adipocitele subcutanate și viscerale, pre-tratamentul cu ZAG nu a avut niciun efect asupra răspunsul lipolitic.
Aceste rezultate sugerează că ZAG poate acționa sinergic cu agoniștii β3-AR pentru a mobiliza lipidele. Sensibilizarea adipocitelor la BRL a fost observată chiar și în cultură pe termen scurt după incubarea timp de 2 h cu ZAG, dar nu cu izoproterenol Figura 6b. Mecanismul prin care se produce acest lucru va face obiectul unui studiu ulterior.
Studiile in vitro privind adipocitele izolate arată că ZAG este la fel de eficient ca izoproterenolul în inducerea lipolizei cu o eficacitate maximă modalități eficiente de a arde grăsimea din burtă 0, 58 μM 25 μg ml Această concentrație de ZAG se apropie de nivelul seric 26 μg ml- 1 raportat utilizând o imunotestare, 27 dar este mult mai mare decât nivelul seric raportat utilizând spectrometria de masă cu cromatografie în lichid 3, 65 μg ml- 1.
Efectul lipolitic scăzut al catecolaminelor și al agoniștilor β-AR asupra adipocitelor subcutanate și viscerale a fost raportat anterior, 29 și poate fi datorat diferențelor de număr de β3-AR.
Cu toate acestea, adipocitele epididimale prezintă o reducere mai pronunțată a lipolizei după tratamentul pre-tratament cu isoproterenol decât cele din grăsimile subcutanate. În plus, adipocitele subcutanate au un nivel mai scăzut al ARNm pentru HSL la starea de echilibru, în concordanță cu rata de lipoliză redusă.
Testarea ipotezei: o modalitate de a-ți dovedi revendicarea folosind valoarea p
Studiile anterioare au arătat că catecolaminele translocă HSL pe substratul său pe suprafețele picăturilor lipidice din celulele grase. Șoarecii lipsiți de fosfatază-1 protein kinază activată de mitogen au activitățile crescute de proteină kinază ERK și p38 mitogen activate în WAT și sunt rezistente la obezitatea indusă de dietă, datorită unei cheltuieli sporite de energie. Expresia crescută a HSL în cașexie sensibilizează adipocitele la stimulii lipolitic.
Aceasta ar putea reflecta ritmul lent al lipolizei în aceste depozite de țesut adipos. Palmitatul [U- 14 C] eliberat a fost îndreptat în principal către ficat și, într-o măsură mai mică, la BAT. HSL a fost inițial considerată a fi enzima care limitează viteza pentru lipoliză, dar datele recente 35 sugerează că ATGL poate fi limitarea ratei.
