Pierderea de grăsime topică dmso, Pierderea E2F1 induce dezvoltarea tumorii spontane în epiderma cu deficit de Rb

Cercetare preclinică Abstract Studiul prezent a fost destinat să exploreze efectele acizilor grași polinesaturați ω-3 produsi endogene PUFA asupra inflamației pielii induse de UV și a fotocarcinogenezei folosind șoareci transgenici fără grăsime-1 care conțin gena ω-3 desaturază capabilă să transforme ω -6 la ω-3 PUFA.

La expunerea la iradierea UVB, șoarecii transgenici ai grăsimii-1 au prezentat o hiperplazie epidermică semnificativă, o afectare cutanată oxidantă și o fotocarcinogeneză comparativ cu șoareci de tip sălbatic. Factorul de transcriere Nrf2 este un regulator principal al expresiei genelor antiinflamatorii și antioxidante. În timp ce expresia proteinei Nrf2 a fost semnificativ îmbunătățită, nivelul transcripției mRNA a fost abia schimbat în pielea de șoarece transgenică a grăsimii Aplicarea topică a acidului docosahexaenoic DHAun reprezentant ω-3 Pierderea de grăsime topică dmso, la șoareci fără șoareci de tip sălbatic a indus expresia proteinei țintă Nrf2, heme oxigenaza-1 în piele și protejată împotriva stresului oxidativ indus de UVB, inflamație și papilomageneză.

Mai mult, supraexpresia tranzitorie a genei grăsime-1 în celulele JB6 epidermice de șoarece a dus la acumularea sporită a proteinei Nrf2.

9 days of DMSO

Luate impreuna, rezultatele noastre indica faptul ca DHA functionale functionale si DHA aplicate topic potenteaza apararea celulara impotriva inflamatiei pielii induse de UVB si a fotocarcinogenezei prin activarea crescuta a Nrf2 si cresterea expresiei genei citoprotectoare. Introducere Pielea este expusă în mod repetat la diverși stresatori externi, cum ar fi radiația solară și microbii 1, 2.

Ca răspuns la schimbarea mediului extern și intern, pielea produce citokine, neurotransmițători, hormoni neuroendocrine și receptorii lor corespunzători 3, 4, 5.

Aceste capacități de piele îi permit să păstreze homeostazia, care este esențială pentru sănătatea și supraviețuirea organismului. Expunerea pielii la ultraviolete B excesive UVB cauzează producerea de specii reactive de oxigen ROScare determină infiltrarea masivă a celulelor inflamatorii, în special a neutrofilelor la locul leziunilor tisulare 6.

ROS joacă roluri importante în modularea transducției semnal intracelulare implicate în fiecare etapă a fotocarcinogenezei, adică inițierea, promovarea și progresia 7. Una dintre principalele enzime care mediază transducția semnalului inflamator este ciclooxigenaza-2 COX-2 care catalizează etapa de limitare a vitezei în biosinteza pierderea de grăsime topică dmso.

Factorul nuclear kappa B NF-κB și traductorul de semnal și activatorul de transcripție 3 STAT3 sunt doi factori reprezentativi de transcripție sensibili la redox responsabili pentru reglarea expresiei COX-2 8, 9, 10, 11, 12, 13, O baterie de enzime antioxidante joacă un rol central în contracararea acumulării excesive de ROS, menținând astfel echilibrul redox celular.

EUR-Lex - R - EN - EUR-Lex

Regiunile promotoare proximale ale genelor care codifică HO-1 și NQO1 conțin o secvență de consens cunoscută ca elementul de răspuns antioxidant ARE care este un situs de legare preferat al factorului nuclear factor 2-eritroid Nrf2 Lungimea mare a acizilor grași polinesaturați ω-3 ω-3 PUFA abundenți în uleiul de pește au fost raportate că păstrează proprietăți antiinflamatorii și antioxidante marcate, care contribuie la potențialul lor de chemoprevenție 16, În contrast, ω-6 PUFA au activități pro-inflamatorii.

Kang și colab. Prin utilizarea acestor șoareci transgenici fără grăsimi fără păr, menținute pe dieta conținând ω-6 PUFA, am investigat efectul formării endogenă a ω-3 PUFA asupra dezvoltării tumorilor induse de UVB, precum și stresului oxidativ și inflamației în piele. Astfel, șoarecii transgenici ai grăsimii-1 din tulpina C57BL6 au fost apoi reîncărcați înapoi de cinci ori față de șoarecii fără șoarece SKH Toate experimentele au fost realizate prin compararea șoarecilor din același fundal genetic cu sau fără transportul transgenei de grăsime Mutația fără păr prezintă o dezvoltare normală a primului strat de păr în primul ciclu de păr.

Începând cu vârsta de 2 săptămâni, ei și-au pierdut rapid haina de păr La înțărcare, erau fără păr.

• Jurnalul Oficial L /
• S-au folosit cu succes solvenţii aprotici D.

Aceasta indică faptul că transgena este activă din punct de vedere funcțional și poate fi transmisă. După un ciclu de păr inițial, pielea a devenit în cele din urmă fără păr, potrivită pentru studiile ulterioare efectuate. După regimul dietetic, profilurile PUFA ale pielii de șoarece au fost analizate prin cromatografie în fază gazoasă.

Tehnica-farmaceutica - Стр 31

Datele sunt exprimate ca mijloace ± SE. Țesuturile încorporate în formă de formalină și parafină din șoareci iradiați cu UVB au fost, de asemenea, imunologiați pentru fosfo-STAT3 Tyr și au fost contracționați cu hematoxilină. Măriri, × Scara de bare este de μm. Șoarecii au fost sacrificați după 2 ore de iradiere UVB. Animalele de control s-au tratat numai cu acetonă și s-au lăsat neiradiate. Secțiunile țesuturilor cutanate au fost, de asemenea, supuse analizei imunohistochimice a fosforilatului STAT3 la Tyr Imagine de dimensiune completă Mărimea completă Inflamația cutanată acută indusă de UVB a fost ameliorată în cazul șoarecilor transgenici și DHA tratați cu grăsime-1 Grosimea epidermei neeratinizate a fost scăzută la nivelul pielii șoarecilor cu grăsime-1 fără irradiție pe termen scurt, UVB, comparativ cu cele de tip sălbatic WT fără păr Fig.

STAT3 activat în mod persistent joacă un rol important în fotocarcinogeneza prin creșterea reglementării genelor implicate în inflamația asociată tumorii, anti-apoptoza și proliferarea Unul dintre evenimentele esențiale în activarea semnalizării STAT3 este fosforilarea la restul tirozinei Tyr O proporție semnificativ redusă de celule fosforilate STAT3-pozitive a fost observată în pielea de șoarece transgenică de grăsime-1 iradiată cu UVB timp de 2 ore. Creșterea tumorii induse de UVB a fost suprimată în șoarecii fără grăsime-1comparativ cu cea pierderea de grăsime topică dmso șoarecilor WT După iradierea repetată UVB de trei ori pe săptămână timp de 23 de săptămâni, au fost luate fotografii reprezentative ale șoarecilor din diferite grupuri.

Figura 2A arată că sarcina tumorii la pierderea de grăsime topică dmso fără grăsime fără păr a fost mult mai scăzută decât cea a șoarecilor WT fără păr. Multiplicitatea tumorii dintre cele două grupuri experimentale a fost semnificativ diferită figura 2B. La șoarecii lipsiți de grăsime-1numărul mediu de tumori pe șoarece a fost de 7, comparativ cu 16, 5 în colegii de la WT.

Creșterea tumorii induse de UVB a fost suprimată în șoarecii fără grăsime-1comparativ cu cea a șoarecilor WT. A Imaginile fotografice reprezintă papilele formate la săptămâna 23 de tratament cu UVB. B Începând de la patru săptămâni după tratamentul cu UVB, tumori cu diametrul de cel puțin 1 mm au fost numărate săptămânal până la săptămâna a 23 -a.

133851261-119352752-Tehnica-farmaceutica

Rezultatele au fost exprimate ca numărul mediu de papilome pe șoarece. Rezultatele sunt exprimate ca mijloace ± SD. Imagine de dimensiune completă Exprimarea indusă de UVB a COX-2 și fosforilarea STAT3 au fost diminuate în papiloamele șoarecilor fără grăsime-1 comparativ cu cei din șoarecii WT Reglarea inadecvată necorespunzătoare a COX-2 induce modificări maligne în keratinocitele epidermice 26 și prelungește supraviețuirea celulelor maligne sau transformate cu potențial metastatic O scădere semnificativă a exprimării COX-2 atât la nivelul transcripțional figura 2Ccât și la nivelul translațional figura 2D a fost observat în papiloamele șoarecilor fără grăsime Îngroșarea stratului epidermal și infiltrarea celulelor inflamatorii în pielea de șoarece WT cauzată de expunerea UVB pe termen lung au fost reduse în pielea grăsimilor-1 figura 2E, partea superioară.

De asemenea, expresia COX-2 fig. Astfel, am examinat efectul aplicării repetate a DHA pe carcinogeneză cutanată indusă de UVB la șoareci normali fără păr.

A fotografii reprezentative ale animalelor din diferite grupuri de tratament.

Pierderea E2F1 induce dezvoltarea tumorii spontane în epiderma cu deficit de Rb

B numărul mediu de papilomi per șoarece în diferite grupuri de pierderea de grăsime topică dmso. Imagine de dimensiune completă Infecția cutanată oxidată indusă de UVB a fost atenuată la șoarecii tratați cu grăsime-1 transgenic și DHA Linii multiple de dovezi sugerează că generarea de ROS indusă de UVB este responsabilă de hiperplazia pielii 28, precum și de peroxidarea lipidică Mai mult, expunerea repetată la UVB până la 23 săptămâni a crescut expresia proteinei modificate cu 4-HNE, care a fost blocată în pielea șoarecilor pre-tratate cu DHA fig.

Forme de țesut fixat cu formalină și parafină din șoareci pierderea de grăsime topică dmso cu UVB au fost imunologi pentru detectarea expresiei proteinei modificate 4-HNE panouri superioare sau MDA panouri de fund.

C Tratamentul animalelor și alte detalii experimentale sunt aceleași ca cele descrise în legenda din figura 3.

Imagine de dimensiune completă Inducția mediată de Nrf2 a exprimării genelor citoprotectoare a fost crescută în pielea șoarecilor tratați cu grăsime-1 și DHA Pentru a investiga dacă scăderea numărului de papilomuri formate prin iradierea UVB se datorează creșterii capacității de apărare celulară care contracarează acumularea excesivă de ROS, am analizat expresia genei antioxidante în pielea șoarecilor tratați cu grăsimi-1 și DHA.

Creșterea acumulării Nrf2 a fost observată la nivelul pielii șoarecilor cu grăsime-1 fig. Cu toate acestea, nu s-a găsit nicio modificare semnificativă a nivelului epidermic al mRNA Nrf2 la șoarecii de grăsime-1comparativ cu pielii lor de vârstă corespunzătoare șoarecilor WT Figura 5A. În mod constant, stabilizarea proteinei Nrf2 și reglarea în sus a proteinei sale țintă, HO-1, s-au observat în pielea de șoarece de grăsime-1 fără păr la săptămâna 23, măsurată prin analiză Western blot Figura 5D.

În plus, aplicarea repetată a DHA de trei ori pe săptămână timp de 23 de săptămâni a indus expresia HO-1 în pielea de șoarece figura 5E.

1. Pierdere în greutate hooponopono
2. Orientările OCDE privind testarea substanțelor chimice sunt revizuite periodic pentru a se asigura că acestea reflectă cele mai bune cunoștințe științifice disponibile.
3. Urmăriți progresul pierderii de grăsime
5. Slabesc fara sa incerc
6. Aceste modificări fenotipice sunt asociate cu creșterea expresiei membrilor E2F și a activității transcripționale dependente de E2F.
8. Slăbind bine

Inducția mediată de Nrf2 a expresiei genelor citoprotectoare a fost crescută în țesuturile cutanate ale șoarecilor transgenici și DHA tratați cu grăsime B Țesuturile de piele colectate au fost plasate pe gheață și grăsimea a fost îndepărtată pentru a obține un strat epidermal.

C Blocurile de țesut pielii 75 kg pierd in greutate în parafină au fost analizate prin IHC, iar nivelele Nrf2 pete maronii au fost comparate între șoareci transgenici fără șoarece și WT.

Animalele de control s-au tratat cu acetonă în locul DHA. Imagine de dimensiune completă Inflamația indusă de UVB și stresul oxidativ au fost mai puțin severe în fibroblastele embrionare de pierderea de grăsime topică dmso MEF de la șoareci grași-1 decât cei din animalele WT Pentru a confirma în continuare rezultatele in vivoMEF-urile au fost izolate atât din WT, cât și din șoarecii transgenici de grăsime Cu toate acestea, reducerea nivelurilor de ω-6 PUFA în MEF - urile de grăsime-1 nu a fost atât de dramatică ca creșterea acizilor grași ω Această constatare indică faptul că Nrf2 este esențială pentru inducerea exprimării genelor citoprotectoare în MEF - urile de grăsime Embrionii au fost izolați de acești șoareci și au fost utilizați pentru pierderea de grăsime topică dmso fibroblastelor.

Rezultatele sunt exprimate ca mijloace ± SE. Supraexpresia genei de grăsime-1 a crescut expresia mediată de Nrf2 a enzimelor citoprotectoare figura 7A. Spre deosebire de exprimarea crescută a proteinei Nrf2, celulele JB6 transfectate tranzitoriu cu vectorul pCMV-HA- grăsime-1 nu au prezentat nicio modificare semnificativă în starea de echilibru a transcripției mRNA figura 7A. De asemenea, am examinat efectul DHA asupra localizării nucleare a Nrf2 în celule JB6 epidermice de șoarece cultivate.

După cum se arată în figura 7B, DHA a crescut acumularea Nrf2 în nucleu, ceea ce a fost confirmat prin analiză imunocitochimică. Pentru a determina dacă DHA stabilizează proteina Nrf2 fără a induce sinteza de novoam monitorizat degradarea proteinei Nrf2 indusă bazal și DHA în celulele JB6 după inhibarea sintezei proteinelor de către cicloheximid.

EUR-Lex Access to European Union law

Așa cum este ilustrat în figura 7C, proteina Nrf2 din celulele martor netratate a degradat rapid după adăugarea cicloheximidei, în timp ce Nrf2 pierderea de grăsime topică dmso celulele JB6 tratate cu DHA a suferit o degradare mai lentă. Mai mult, majoritatea proteinelor supuse degradării proteasomale sunt marcate prin ligarea covalentă prealabilă a moleculelor de ubiquitină la gruparea ε-amino a resturilor specifice de lizină.

Un test de ubiquitinizare a arătat că apariția numărului ubiquitinated Nrf2 a scăzut cu o creștere concomitentă a acumulării Nrf2 în celulele tratate cu DHA figura 7E. B Celulele JB6 au fost tratate cu DHA 50 pM timp de 6 ore și localizarea nucleară a Nrf2 a fost determinată prin imunocitochimie conform protocolului descris în Materiale și metode. Scara de bare este de 20 μm. Celulele de control au fost tratate numai cu DMSO. Imagine de dimensiune completă Discuţie Dovezile de montare din studii epidemiologice și de laborator sugerează că lanțurile lungi ω-3 PUFA posedă o gamă largă de proprietăți benefice pentru sănătate 16 și exercită efecte protectoare împotriva inflamației induse de stresul oxidativ32, a îmbătrânirii 33, a cancerului 34 etc.

Rahman și colab. În concordanță cu observația de mai sus, am descoperit că aplicarea locală a DHA atenuează hiperplazia epidermică și reduce acumularea de produse de peroxidare a lipidelor, cum ar fi 4-HNE și MDA, în pielea de șoarece irradiată cu UVB.

În plus, studiul nostru a arătat pentru prima dată că inhibarea papillomageneză a pielii de șoarece indusă de UVB prin DHA aplicată local. Aceste constatări sunt în concordanță cu efectele antioxidante raportate anterior ale DHA 35, Studiul prezent a fost destinat să evalueze efectele chemopreventive ale PUFAs ω-3 produse endogen împotriva fotocarcinogenezei folosind șoareci transgenici de grăsime-1 fără a fi nevoie de aprovizionare exogenă.

Argint Coloidal Forte 30 ppm, Aghoras, ml | alegsatraiesc.ro

O mutație homozigoasă în gena fără păr cauzează o pierdere permanentă a părului, denumită alopecie atât la om, cât și la șoareci Soarecii fără păr au fost utilizați istoric în studiul toxicității cutanate induse experimental și a carcinogenezei COX-2 a fost identificat ca o legătură moleculară între inflamație și promovarea tumorii Expunerea anormală a COX-2 a fost observată la papilomii de piele de șoarece formați după expunerea cronică la UVB 40, Aceste constatări indică faptul că nu numai aplicate local, dar și administrate sistemic ω-3 PUFA ar putea fi eficiente pentru chemoprevenirea fotocarcinogenezei.

Un rol critic pentru Pierderea de grăsime topică dmso în promovarea proliferării, metastazelor și evaziunii imune a celulelor tumorale a fost demonstrat în diferite condiții patofiziologice Kim și colab.

Astfel, inhibarea semnalizării STAT3 supraactivată aberant este considerată o abordare pragmatică pentru realizarea prevenirii cancerului de piele.

Stresul oxidativ mediat de ROS este capabil să încurajeze dezvoltarea diferitelor stări patologice, în principal prin apărarea antioxidantă homeostatică a pielii copleșitoare. Corpul protejează împotriva stresului oxidativ și menține mediul optim redox intracelular prin activarea unei baterii de enzime antioxidante În conformitate cu această noțiune, șoarecii care exprimă HO-1 de tip sălbatic au prezentat celulita pleacă dacă pierdeți în greutate multiplicitate mai mică a papiloamelor cutanate decât au făcut animalele knockout HO-1 Pierderea de grăsime topică dmso asemenea, șoarecii NQO1-null au fost susceptibili la tumorigeneza cutanată indusă experimental într-o măsură mai mare decât șoarecii de tip sălbatic 45, Nrf2 șoarecii knock-out au fost mai predispuși să dezvolte tumori cutanate induse chimic În studiul nostru prezent, una dintre modificările notabile care însoțesc un grad mai scăzut de stres oxidativ, precum și inflamația și reducerea formării papilomului în țesuturile pielii de șoareci grași-1 provocați cu iradierea UVB a fost inducția Nrf2 mediată de expresia genelor citoprotectoare.

Deoarece șoarecii de grăsime-1 au prezentat inducție pronunțată constitutivă a HO-1 și NQO1, precum și acumularea Nrf2 în pielea lor, am explorat baza mecanică pentru efectele antioxidante provocate de producția endogenă de ω-3 PUFA prin utilizarea grăsimii-1 MEFs. Inhibarea expresiei HO-1 și NQO1 în MEF - urile grăsime-1 transfectate de Nrf2 sugerează că expresia acestor enzime antioxidante a fost indusă în principal prin upregularea semnalizării Nrf2 la șoarecii de grăsime Mai mult, DHA a amplificat translocarea nucleară a Nrf2 prin stabilizarea acestui factor de transcripție prin inhibarea ubiquitinării și a degradării proteasomale 26S în celulele JB6.

În concluzie, studiul prezent demonstrează că producția constitutivă de acid gras omega-3 în șoarecii de grăsime-1 și aplicarea topică a DHA la șoareci de tip sălbatic protejează împotriva daunelor cutanate inflamatorii și oxidative provocate de UVB și pierderea de grăsime topică dmso prin suprimarea activării și upregulării STAT3 Exprimarea genelor citoprotectoare mediate de Nrf2. Aceste rezultate evidențiază importanța menținerii unor niveluri adecvate de PUFA intracelular ω-3 în tratamentul tulburărilor cutanate care sunt adesea cauzate de inflamația persistentă și stresul oxidativ.

Louis, MO. Embrionii au fost obținuți în ziua Analiza compoziției PUFA Nivelurile de PUFA reprezentative pentru ω-6 și ω-3 au fost determinate prin utilizarea cromatografiei de gaz, așa cum s-a descris anterior Vârfurile de acizi grași rezultați au fost identificați prin comparație cu standardele de referință ale esterului metilic al acizilor grași Sigma Aldrich, St. Probele de piele dorsală au fost obținute pentru foi de epidermă 2 ore mai târziu.

Argint Coloidal Forte 30 ppm, Aghoras, 480 ml

Șoarecii au fost sacrificați, iar pielea și tumorile lor au fost colectate pentru studii ulterioare. S-a efectuat imunohistochimia IHC pentru a detecta expresia proteinei. Secțiunile au fost tăiate pe diapozitive din sticlă silanizată, deparafinate de trei ori cu xilen și rehidratate prin baie de alcool clasificată. Locurile de legare a peroxidazei au fost detectate prin colorare cu tetrahidroclorid de 3, 3'-diaminobenzidină.

În cele din urmă, contracararea a fost efectuată utilizând hematoxilina Mayer. Liza tisulară și extracția proteică Epiderma fără grăsime a fost plasată imediat în azot lichid și pulverizată în mortar. Celulele tratate au fost recoltate, spălate cu PBS și suspendate în tamponul de lizare, așa cum s-a menționat mai sus, timp de 1 oră pe gheață. Lizatele au fost centrifugate la 14, g timp de 15 minute la 4 ° C. Supernatantul a fost colectat ca fracțiune citozolică.